從(cóng)浙江、上(shàng)海(hǎi)、江蘇✘π¶>、山(shān)東(dōng)、河(hé)南(nánβ∏↓)、廣西(xī)采集了(le)26份表現(xiàn)雙生(shēng)病毒症狀的(de)番茄樣♠×品,利用(yòng)雙生(shēng)病毒簡并引物(wù)PA/PB擴增得(de)到(dào)約500 bp的(de)特異片段,經克隆測序确定所得(de)番茄樣品均感染雙生(shēng)病毒。在GenBank上(shàng)比對(duì)分(fēn)析表明(φ↑míng),共檢測到(dào)三種不(bù)同的(de)病毒,即番茄黃(huáng)化(huà)曲葉病毒(Tomato yellow leaf c₽✔url virus,TYLCV)、台灣番茄曲葉病毒(Tomato leaf curl Tai♠ε≥wan virus,ToLCTWV)以及中國(guó)番木(mù)瓜曲葉病毒(Papaya leaf curl China★§ virus,PaLCuCNV)。所有(yǒu)分(fēn)離(lí)物(wù₽↕₹<)都(dōu)沒有(yǒu)發現(xià✔♣n)伴随有(yǒu)衛星DNAβ分(fēn)子(zǐ)或DNA B組份。對(duì)浙江、江蘇及山(shā¥♦✔↕n)東(dōng)的(de)TYLCV分(fēn)離(lí)物(wù)進行(xíng)了(le)全序列¥ •測定,結果表明(míng)各地(dì)分(fēn)離(lí)到(d₽Ω ∞ào)的(de)TYLCV分(fēn)離(lí)物(wù)具有(yǒu)很(hěnΩφ)高(gāo)的(de)序列同源性(＞98%),與TYLCV-IL[IL:Reo](X15656)的(de)序列同源性均大(dà)于97%。通(tōng)過對(duì)GenBank上(shàng)TYLCV代表分(fēn)離(lí)物(wù)全序列進行(xíng)系<€統進化(huà)樹(shù)分(fēn)析,表明(míng)不(bù)同分(fēn)離(l¥₹£ í)物(wù)之間(jiān)序列同源性非常高(gāo),但(dàn)是(shì)仍可(kě)以分(fēn)為(wèi)兩β 大(dà)類群。其中侵染我國(guó)番茄的(de)雙生(shēng)病毒分<Ω§♠(fēn)離(lí)物(wù)都(dōu)屬于₽≥™©第一(yī)類。對(duì)廣西(xī)及河(hé)南(nán)的π§¥(de)PaLCuCNV分(fēn)離(lí)物(wù)進行(xíng)了(le)金(jīn)序列測定"✔&≠,全序列長(cháng)分(fēn)别為(wèi)2748(HeNZM1,FN256260)和(hé)2738(GX4,FN297834)nt。它們與PaLCuCNV-[CN:G2](AJ558123)的(de)同源性為(wèi)94.6%和(hé)89.3%,因此被命名為(wèi)PaLCuCNV-[CN:HeNZM1]和(hé)PaLCuCNV-[cN:GX4]。在浙江溫州的(de)番茄樣品中鑒定到(dào☆→)了(le)台灣番茄曲葉病毒(ToLCTWV),對(duì)ZJWZ5分(fēn)離(lí)物(wù)進行(xíng)了(le↑βγ)全序列克隆測序(2748 nt,FN256292)。它與ToLCTWV-[CN:ZJ16]分(fēn)離(lí)物(wù)(AM698111)的(de)同源性為(wèi)99%,因此被命名為(wèi)ToLCTWV-[CN:WZ5]。構建了(le)侵染番茄的(de)三類雙生(shēng)病€ ←毒(TYLCV、PaLCuCNV和(hé)ToLCTWV)的(de)侵染性克隆,緻病性測定表明(míng),TYLCV-[CN:SH2]和(hé)PaLCuCNV-[CN:HeNZM1]侵染性克隆均可(kě)系統侵染本氏煙(yāπ→¥n)、三生(shēng)煙(yān)、心葉→§煙(yān)、番茄、矮牽牛并表現(xiàn)明(míng)顯症狀,但(dàn)不(bù)能(néng)侵染黃(huá♥ ←±ng)瓜、棉花(huā)、茄子(zǐ)及辣椒。&®¥此外(wài),發現(xiàn)TYLCV能(néng)夠與異源的(de)DNAβ互作(zuò)且誘導比病毒單獨侵染更嚴重的(de)症狀。ToLCTWV-[CN:ZJ16]侵染性克隆能(néng)侵染番茄并産生(shēng)葉片卷曲症狀,但(dàn)不(bù)能(néng)侵染本氏™®煙(yān)、三生(shēng)煙(yān)及矮牽牛。當ToLCTWV-[CN:ZJ16]與異源的(de)DNAβ共同接種時(shí),發現(xiàn)除了(le)在番茄上(shàng)産生α₩(shēng)更嚴重的(de)症狀外(wài),還(hái)能(néng)夠侵染本氏煙(yān)、三生(shēα©ng)煙(yān)及矮牽牛并産生(shēng)嚴重的(de)症狀。搜集了(♥↑le)20個(gè)抗雙生(shēng)病毒的(de)番茄抗性δ¶π材料,利用(yòng)已經報(bào)道(dào)的(de)分(∏Ωfēn)子(zǐ)标記,初步分(fēn)析這(zhè)些(xiē)材料攜™✘帶抗病基因Ty-1、Ty-2和(hé)Ty-3。用(yòng)TYLCV侵染性克隆對(duì)抗性材料進行(xíng)抗性篩選,發現(xiàn)TYLCV接種後這(zhè)些(xiē)抗性材料的(de)抗性表現(xiàn)差異很≈Ω(hěn)大(dà),發病率與病毒含量并不(bù)相(xiàng)關。用(yòng)生(s♥•♥hēng)物(wù)信息學軟件(jiàn )對(duì)侵染我國(guó)番茄的(de)TYLCV、TYLCCNV、ToLCCNV、ToLCTWV、PaLCuCNV、TbCSV和(hé)TYLCTHV等雙生(shēng)病毒的(de)基因組全序列進行(xíng)了(le¥ )分(fēn)析,選取三個(gè)保守區(qū)段并将其融合作(zuò↕£)為(wèi)沉默的(de)靶基因,構建植物(wù)表達載體(tǐ)pBin438-hp。将該載體(tǐ)轉化(huà)番茄并獲↔$π得(de)轉基因植株,經PCR驗證得(de)到(dào)34株轉基因番茄植株,對(duì)病毒的(de)抗性正在測定中。
